复制型HBV-Tg小鼠原代肝细胞的培养

摘要

目的建立复制型HBV-Tg原代肝细胞体外培养方法,观察HBV-Tg小鼠原代肝细胞的氧化应激敏感性。方法改良的两步灌注法分离、纯化、培养HBV-Tg小鼠原代肝细胞,24孔板培养7天,每天换液,收集上清,检测乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）、丙氨酸转移酶（alanine transaminase,ALT）、天冬氨酸转移酶（aspartate trans-aminase,AST）、白蛋白（albumin,ALB）和病毒学指标HBsAg、HBV-DNA的水平;分离HBV-Tg小鼠与野生型Balb/c鼠肝细胞,培养24h后加不同浓度酒精,于16h后检测两种小鼠原代肝细胞培养上清的AST水平。结果 HBV-Tg小鼠原代肝细胞从铺板第3天开始,LDH、ALT、AST水平达到平衡,膜稳定性恢复正常;在第3~5天ALB水平稳定于较高水平;HBV复制及表达指标（HBsAg、HBV-DNA）在铺板后1~5天能保持较高水平;酒精对原代肝细胞的氧化应激损伤,浓度〈2%时,野生型Balb/c鼠肝细胞损伤程度明显低于HBV-Tg小鼠,浓度≥2%时,两种鼠肝细胞的损伤程度相当。结论复制型HBV-Tg小鼠原代肝细胞培养可以在体外稳定维持肝细胞活性与功能,表达高水平的HBV-DNA和HBsAg,为体外研究乙型肝炎病毒发病机制提供新的模型。