中国人肠道产甲酸草酸杆菌frc基因的分离及其在真核细胞中的表达

摘要

目的：探讨中国人肠道产甲酸草酸杆菌甲酰辅酶A转移酶基因（frc）的分离、克隆和鉴定。方法：提取中国人肠道产甲酸草酸杆菌的基因组DNA，利用PCR技术扩增frc基因片段并克隆入真核表达载体pEGFP—C1，重组质粒命名为pEGFP—frc，通过限制性内切酶酶切电泳和测序鉴定插入片段。将pEGFP—frc通过脂质体转染293细胞，通过逆转录PCR（RT—PCR）和蛋白印迹（Western blot）分别从mRNA和蛋白水平检测frc基因在真核细胞中的表达。结果：中国人肠道产甲酸草酸杆菌fre基因全长1287bp，存在53个碱基和4个氨基酸残基的变异，与GenBank中的frc基因的碱基序列的同源性为95．88％，氨基酸残基序列的同源性为99．07％。转染293细胞后24-72h，可观察到明亮的绿色荧光，RT—PCR和Western blot分别从mRNA和蛋白水平上检测到frc基因在真核细胞中的表达。结论：中国人肠道产甲酸草酸杆菌中可以分离出frc基因；中国人肠道产甲酸草酸杆菌frc基因存在一定的变异；frc基因可在真核细胞293细胞中表达。