猪精液酸性N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的纯化及性质

摘要

以杜洛克猪精液为材料,采用硫酸铵分级沉淀、DEAE-32阴离子交换柱层析和SephadexG-100分子筛柱层析纯化,获得纯化倍数为27.64、比活力为1773.25Umg-1的酸性N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶纯酶制剂.经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定,纯酶两种亚基相对分子质量分别为129.13×103和62.24×103.对其酶学性质的研究结果表明,酶的等电点为5.10,最适pH值为5.5,最适温度为60℃.酶在pH3.6～9.2、温度10℃～55℃的范围内较稳定.以对硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(pNP-NAG)为底物,测得米氏常数Km为0.455mmolL-1,最大反应速度Vm为17.34μmolL-1min-1|活化能为41.70kJmol-1.