内毒素受体TLR4基因多态性“Asp299Gly”的分型检测

摘要

目的 :建立一种用于内毒素受体 TL R4基因多态性“Asp2 99Gly”检测的方法 ,并在中国汉族人中进行该位点的检测。 方法 :以等位基因特异性 PCR原理为基础 ,在两个等位基因特异性引物的 3′端第 3位引入不配对碱基以增加特异性 ,与共同的下游引物分别构成两个 PCR反应体系。采用 PCR定点突变方法得到含和不含“Asp2 99Gly”突变位点的 DNA片段插入质粒作为标准模板 ,用以验证这一方法的鉴别效果 ,并采用 PCR- RFL P分析和测序加以验证。 结果 :该方法用于“Asp2 99Gly”检测的结果 ,与 PCR- RFL P分析的结果及测序的结果完全相符 ,采用我们建立的已知基因型的突变型和野生型重组质粒作模板验证 ,结果也完全相符。采用该方法共检测 92份汉族人群 DNA样本 ,未发现“Asp2 99Gly”的携带者。结论 :以等位基因特异性 PCR原理为基础的检测方法 ,是一种可用于 TL R4基因多态性“Asp2 99Gly”检测的简便、快速、准确、适合于一般实验室的好方法。中国汉族人群携带这一突变的基因频率可能很低。