聚合酶链式反应变性及退火温度与产物假阴性之间的关系

摘要

目的探讨聚合酶链式反应(PCR)变性及退火温度与产物假阴性之间的关系。方法以含有HBV完整基因组的重组质粒pUC-19为模板进行PCR扩增,人为改变PCR循环的变性或退火温度,探讨其与产物假阴性之间的关系。结果随着变性温度的降低和退火温度的升高,PCR扩增效率降低,产物量明显减少。当变性温度降低至85℃及85℃以下,退火温度升高至72℃时,琼脂糖凝胶电泳肉眼观察不到扩增产物。结论过低的变性温度和过高的退火温度会导致PCR产物出现假阴性。