RNA干扰靶向抑制酪氨酸蛋白激酶对哮喘小鼠树突状细胞功能的影响

摘要

目的通过特异性微小干扰RNA(siRNA)靶向抑制小鼠骨髓来源树突状细胞(DC)的酪氨酸蛋白激酶(Syk)的基因表达,阻断树突状细胞的成熟,从而阻断Syk所介导的细胞内及细胞间的信号传导通路,研究Syk与DC之间的关系。方法化学法合成21～23 bp的小鼠树突状细胞Syk基因siRNA片段A、B、C、D,用Lipofectamine 2000作为转染试剂,将siRNA片段转染哮喘小鼠骨髓来源DC,作用48 h后再与正常小鼠脾脏来源T淋巴细胞混合反应48 h,之后用ELISA法检测T淋巴细胞分泌细胞因子(IL-4、IL-13、IL-2和INF-γ)的水平。用Western Blot检测DC表达Syk蛋白的量,判断Syk基因是否被沉默,剔除无效片段。结果siRNA片段A、C、D干扰组小鼠DC细胞Syk蛋白表达减少;B组没有明显变化,为无效片段。siRNA干扰组IL-4、IL-13的水平较未干扰组明显下降(P均0.05)。结论Syk特异性SiRNA能够有效抑制Syk基因表达,可阻遏DC的抗原递呈作用以及活化、分化T淋巴细胞的功能。