人生长激素基因逆转录病毒载体的构建及其对3T3和ES细胞的转化与表达

摘要

为了研究生长激素基因在异源细胞中的表达，构建了携带人生长激素基因（ｈＧＨ）的逆转录病毒载体ｐＩＮＳ－ＧＨ，并将其导入小鼠成纤维细胞３Ｔ３和小鼠胚胎干细胞（ＥＳ细胞）ＣＣＥ中。ｐＩＮＳ－ＧＨ转化３Ｔ３细胞，获得了高效表达的克隆，即用放射免疫法检测到克隆培养基中有大量的人生长激素蛋白富积，如ＧＨＳＮＣ２０，富积率高达３７８４ｎｇ／ｍｌ，而且外源基因的整合很稳定。不同的３Ｔ３转化克隆的表达率有显著的差异，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交的结果表明，这种差异与外源基因整合的拷贝数无关。ｐＩＮＳ－ＧＨ转化ＣＣＥ细胞没有获得明显表达的克隆，而且外源基因的整合也不稳定。转化的ＥＳ细胞克隆总ＤＮＡ的Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交结果表明，ｈＧＨ基因的确整合到细胞基因组中。目前尚未发现明显的外源ＤＮＡ重排的迹象。