长链非编码RNA SNHG14通过靶向miR-144-3p调控胃癌细胞增殖和凋亡的体外实验研究

摘要

背景长链非编码RNA(long-chain non-coding RNA,LncRNA)与胃癌发生发展密切相关,LncRNA SNHG14在肿瘤发生过程中发挥癌基因作用,但其在胃癌中的作用机制尚未阐明.starBase预测显示miR-144-3p可能是SNHG14的靶基因,但SNHG14是否可通过调控miR-144-3p的表达而参与胃癌发生过程尚未可知.目的探讨LncRNA SNHG14是否可通过靶向miR-144-3p调控胃癌细胞增殖与凋亡.方法实时荧光定量聚合酶链反应检测人胃黏膜上皮正常细胞与胃癌细胞中SNHG14与miR-144-3p的表达情况.体外培养人胃癌MGC-803细胞,随机分为5组:空白(NC)组、阴性对照(si-con)组、SNHG14小干扰RNA(si-SNHG14)组、SNHG14小干扰RNA+miR-144-3p阴性对照(si-SNHG14+anti-miR-con)组、SNHG14小干扰RNA+miR-144-3p特异性寡核苷酸抑制剂(si-SNHG14+anti-miR-144-3p)组.甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测各组细胞的增殖情况;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;双荧光素酶报告系统验证SNHG14与miR-144-3p的靶向调节关系.蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中细胞周期蛋白1(cyclinD1)、B淋巴细胞瘤2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、p21、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X protein,Bax)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)、磷脂酰肌醇激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)信号通路相关蛋白表达.结果SNHG14在胃癌细胞中的表达水平显著高于胃黏膜上皮正常细胞(P<0.05),而miR-144-3p的表达水平显著降低(P<0.05);与NC组、si-con组比较,si-SNHG14组MGC-803细胞OD值显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著增高(P<0.05),cyclinD1、Bcl-2、PI3K的磷酸化(p-PI3K)、AKT的磷酸化(p-AKT)蛋白表达显著降低(P<0.05),p21、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达显著升高(P<0.05);双荧光素酶报告基因显示SNHG14可靶向结合miR-144-3p,并可负向调控miR-144-3p的表达与活性;干扰miR-144-3p可部分逆转沉默SNHG14对胃癌细胞增殖、凋亡及PI3K/AKT信号通路的作用.结论SNHG14能够通过靶向结合并下调miR-144-3p的表达促进胃癌细胞增殖,抑制细胞凋亡,其可能通过激活PI3K/AKT信号通路而发挥作用.