利用重组反转录病毒表达马立克氏病病毒Meq基因

摘要

为研究马立克氏病病毒（ＭＤＶ）Ｍｅｑ蛋白的生物学功能，应用磷酸钙与ＭＤＶＭｅｑ基因重组的反转录病毒转染载体质粒ＲＣＡＳ－Ｍｅｑ的ＤＮＡ，转染于鸡胚成纤维细胞系ＤＦ１。经间接免疫荧光技术研究表明，转染后第３天即开始有少量ＤＦ１细胞在细胞核表达Ｍｅｑ蛋白，以后阳性细胞增多，到转染后第７天阳性细胞最多，之后荧光即衰减；通过酶联免疫吸附试验检测，发现细胞培养上清中游离病毒在转染后第５天即可检出，直至第７天仍维持最高水平，第９天开始下降。用细胞培养上清感染ＤＦ１细胞单层，于感染后第２天即可检出Ｍｅｑ蛋白阳性细胞，之后阳性细胞逐渐增多，到第４～５天达高峰，之后逐渐衰减；培养上清中的游离病毒在感染后第４天即可被检出，第５～７天达最高值。研究结果表明：（１）磷酸钙法能很好地将重组质粒ＲＣＡＳ－ＭｅｑＤＮＡ转染到ＤＦ１细胞中，而对细胞的损伤很小；（２）转染后细胞释放出的重组病毒能感染ＤＦ１细胞并稳定地表达Ｍｅｑ蛋白。表明Ｍｅｑ基因在构建的重组病毒基因组中的存在及其转录表达都是稳定的。这为在体内和体外研究ＭＤＶＭｅｑ基因的生物学功能提供了一种非常有效的方法和途径；（３）Ｍｅｑ蛋白仅分布于细胞核（包括核质和核仁）。这一结果证实了?