表达重组干扰质粒对Tca8113细胞c-erbB-2、Bcl-2基因表达干扰作用的实验研究

摘要

目的:探讨表达重组干扰质粒(RNAi技术)对人舌鳞癌细胞株(Tca8113)细胞中c-erbB-2、Bcl-2基因表达的干扰效率。方法:按siRNA设计原则设计针对c-erbB-2、Bcl-2基因的OligoDNA,体外化学合成Oligo DNA,Oligo DNA退火、连接、转化、筛选克隆,构建针对c-erbB-2基因的表达重组RNA干扰质粒(psiC1、psiC2、psiC3)和针对Bcl-2基因的表达重组RNA干扰质粒(psiB1、psiB2、psiB3),细胞脂质体转染Tca8113细胞,Real-time RT-PCR的标准曲线、扩增曲线和熔解曲线的数据收集处理,采用荧光定量RT-PCR方法检测重组干扰质粒对Tca8113细胞中c-erbB-2、Bcl-2基因表达的干扰效率。结果:实时荧光定量RT-PCR方法检测psiC1、siC2、psiC3质粒脂质体转染后c-erbB-2基因的表达情况结果显示psiC2、psiC3相对于对照组均有不同程度的干扰效果,psiC1相对于对照没有干扰效果。psiC2的干扰程度较大为62.68%,psiC3的干扰程度较小为40.61%。psiB1、psiB3相对于对照组无明显干扰效果,psiB2的干扰程度高达66.20%。结论:针对c-erbB-2、Bcl-2基因的表达重组RNA干扰质粒psiC2(gAgTCCCAACCATgTCAAA)、psiB2(CCgggAgATAgTgATgAA)能有效沉默Tca8113细胞中c-erbB-2、Bcl-2基因的表达。