人源酸敏感离子通道1a介导酸引起细胞凋亡的研究

摘要

目的 比较人与小鼠来源酸敏感离子通道1a(ASIC1a)介导酸引起的细胞凋亡.方法 对COS7细胞以及培养的原代皮层锥体神经元转染人或小鼠源ASIC1a质粒,COS7细胞经过pH7.4/pH6.0处理2h,神经元经过pH7.4/pH6.0处理1h,加入PI染色,统计PI阳性细胞比率;对培养的CHO细胞转染人和小鼠源ASIC1a质粒,经过pH7.4/pH6.0/pH6.0+ PcTx-1处理2h,通过荧光显微镜拍照,统计细胞死亡率,通过MTT实验检测细胞活力;采用生物素标记、亲和素沉淀分离ASIC1a膜蛋白,通过免疫印迹实验定量分析ASIC1a膜蛋白.结果 与转染小鼠源ASIC1a的COS7细胞和神经元相比,转染人源ASIC1a的COS7细胞和神经元,由酸引起的细胞PI阳性细胞比率更大,细胞死亡率更高,细胞活力更低,且ASIC1a特异性阻断剂PcTx-1能显著逆转由酸引起的细胞凋亡,人源ASIC1a在细胞膜表达更多.结论 人源ASIC1a比小鼠源ASIC1a介导酸引起的细胞凋亡更重.