可溶性Klotho蛋白抑制高糖诱导的STAT3磷酸化通路减轻肾纤维化

摘要

目的:观察可溶性Klotho蛋白对高糖诱导的信号转导及转录激活蛋白3(signal transducer and activator of transcription,STAT3)信号通路磷酸化和肾小管上皮细胞纤维化相关基因表达的影响。方法:采用体外培养的HK2肾小管上皮细胞,分别设立高糖组(D-葡萄糖30 mmol/L)、正常糖对照组(D-葡萄糖5 mmol/L)、高渗透压对照组(D-葡萄糖5 mmol/L+甘露醇25 mmol/L)、Klotho干预高糖组和HO3867(STAT3磷酸化抑制剂)干预高糖组,应用蛋白印迹法、实时荧光定量PCR(real time fluorescence quantitative PCR,rt-fq PCR)等检测方法分别观察STAT3磷酸化水平变化和肾小管上皮细胞纤维化相关因子的表达水平变化。结果:(1)rt-fq PCR检测结果表明,与正常糖对照组相比,高糖组HK2细胞内源性Klotho m RNA表达显著下降(P0.05);(2)蛋白印迹检测结果表明,与正常糖组相比,高糖可上调HK2细胞内的STAT3磷酸化水平(P<0.01),而可溶性Klotho蛋白干预可显著抑制高糖引起的STAT3磷酸化激活(P<0.01);STAT3磷酸化抑制剂(HO3867)干预可显著抑制高糖诱导的STAT3磷酸化水平升高(P<0.01);(3)rt-fq PCR检测结果表明,高糖组HK2细胞表达的纤维化相关因子(α-平滑肌肌动蛋白、Ⅳ型胶原蛋白α1、纤维连接蛋白)较正常糖对照组升高(P<0.01)。Klotho蛋白可抑制高糖诱导的HK2细胞表达纤维化相关因子(α平滑肌肌动蛋白、Ⅳ型胶原蛋白α1、纤维连接蛋白)(P<0.01)。应用STAT3磷酸化抑制剂(HO3867)可部分下调高糖诱导的纤维化相关因子表达(P<0.01)。结论:可溶性Klotho蛋白可抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞纤维化,其机制可能是部分通过抑制STAT3磷酸化通路实现的。