白念珠菌CDR1和CDR2多克隆抗体制备及鉴定

摘要

目的:制备特异性白念珠菌外排泵(CaCDR1和CaCDR2)的多克隆抗体,为研究CaCDR1和CaCDR2在介导白念珠菌耐药中的作用奠定基础。方法:利用Pfam网络预测程序和Blastn、Blastx程序设计引物,采用PCR法获得白念珠菌SC5314基因组上486 bp长度的CDR1和CDR2目的基因,并将其克隆入pET-28a(+)质粒,构建重组表达质粒后,转化入大肠埃希菌BL21宿主菌内,在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导下表达6×His融合蛋白;经镍柱纯化蛋白后,免疫新西兰兔,制备兔抗多克隆抗体。用ELISA及蛋白印迹法检测该抗体的效价和特异性。结果:ELISA法检测所制备抗体的效价最终定为1∶12 800,工作浓度定为1∶800;蛋白印迹法检测结果显示,抗体能与CaCDR1及CaCDR2蛋白特异性结合。结论:成功获得具有较高效价和良好特异性的CaCDR1、CaCDR2多克隆抗体,可用于白念珠菌CaCDR1、CaCDR2蛋白水平的鉴定。