四君子汤调控线粒体凋亡保护脾气虚模型大鼠视网膜脱离复位后感光细胞的作用

摘要

目的观察四君子汤是否通过线粒体凋亡信号通路发挥对脾气虚型大鼠视网膜脱离(RD)复位后感光细胞的保护作用。方法成年SD大鼠52只随机分为对照组(A组)、RD自动复位组(B组)、脾气虚RD自动复位组(C组)、四君子汤组(D组)。C、D组使用破气耗气加饥饱失常法制备脾气虚证动物模型,实验开始6周后B、C、D组使用视网膜下注射0.1%透明质酸钠的方法制备RD自动复位模型,D组随后灌服四君子汤(20 g/kg)至实验结束。分别于实验开始后8、9周随机分批处死动物取材。记录大鼠进食量、体重及精神状态;比色法测定红细胞膜钠钾ATP酶(Na+-K+-ATPase)活性;JC-1荧光探针法检测视网膜组织线粒体膜电位(ΔΨm)水平;Western Blot检测各组视网膜组织B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及视网膜细胞核细胞凋亡诱导因子(AIF)表达量变化;免疫荧光法检测AIF、细胞色素C(Cyt C)在视网膜组织中的分布。结果与A、B组比较,C、D组大鼠在实验开始后1周出现便溏、精神萎靡、毛色枯黄等脾气虚症状,6周红细胞膜Na+-K+-ATPase活性明显降低(P<0.05),C组上述症状持续至实验结束,D组于9周时上述症状好转,红细胞膜Na+-K+-ATPase活性较C组升高(P<0.05)。与A组比较,B组8、9周视网膜组织ΔΨm降低(P<0.01);与B组比较,C、D组8周时ΔΨm降低(P<0.01);随着实验时间延长,至9周时D组ΔΨm较C组显著升高(P<0.05)。与A组比较,8、9周时C组视网膜组织Bax升高(P<0.05),D组则较C组显著降低(P<0.05),同时9周时C组Bax水平亦高于B组(P<0.01)。8周时C组Bcl-2/Bax较A组降低(P<0.05),9周时较A、B、D组降低(P<0.01)。8周时,与B组比较,C、D组细胞核AIF蛋白表达量升高(P<0.01);至9周时,C组细胞核AIF蛋白表达量仍持续升高,且高于D组(P<0.05)。免疫荧光结果显示B、C、D组AIF及Cyt C较A组着色弥散,其中B组AIF特异性表达于少量外核层细胞核;C组AIF及Cyt C在外核层特异性着色显著;D组AIF及Cyt C在外核层部分细胞着色。结论四君子汤能稳定脾气虚RD自动复位模型大鼠视网膜线粒体内膜及外膜的通透性,抑制线粒体源凋亡信号通路,减少脾气虚RD复位后感光细胞凋亡的发生,发挥神经保护作用。