依达拉奉对视网膜脱离模型大鼠早期感光细胞自噬的调控作用

摘要

目的 研究氧自由基清除剂依达拉奉对视网膜脱离(RD)模型大鼠早期视网膜自噬的调控及感光细胞的保护作用.方法 取51只成年雄性Sprague-Dawley大鼠进行RD造模,另取24只大鼠作为PBS注射组.造模组采用右眼视网膜下注射0.5％透明质酸钠的方法制作RD动物模型.将造模成功大鼠按照随机数字表法随机分为RD模型组和依达拉奉治疗组.依达拉奉治疗组造模后连续给予3 mg/kg依达拉奉腹腔内注射,每天2次,PBS注射组和RD模型组腹腔注射等容量0.9％氯化钠溶液.分别于造模后1、3、7d处死动物并取材.收集眼内液并检测总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性及丙二醛(MDA)含量.Western blot法检测视网膜组织中超氧化物歧化酶2 (SOD2)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、自噬相关基因4(Atg4)、微管相关蛋白质1轻链3(LC3)蛋白表达.全眼球石蜡切片TUNEL染色分析感光细胞凋亡情况.结果 所有RD模型眼视网膜脱离范围均＞60％.不同时间点各组眼内液中MDA含量和T-SOD活性总体比较,差异均有统计学意义(MDA:F分组=385.513,P＜0.01;F时间=13.021,P＜0.01.T-SOD:F分组=48.865,P＜0.01;F时间=7.700,P=0.003);与PBS注射组相比,造模后1、3、7dRD模型组和依达拉奉治疗组眼内液MDA含量显著升高,T-SOD活性显著降低,差异均有统计学意义(均P＜0.05);与RD模型组比较,造模后1、3、7d依达拉奉治疗组MDA含量显著降低,T-SOD活性显著升高,差异均有统计学意义(均P＜0.05).与PBS注射组相比,RD模型组和依达拉奉治疗组造模后1、3、7d视网膜中SOD2和Nrf2蛋白相对表达量显著升高,造模后1、3d视网膜中Atg4、LC3B-Ⅱ/LC3B-I相对表达量显著升高,差异均有统计学意义(均P＜0.05);与RD模型组比较,依达拉奉治疗组造模后1、3、7d视网膜中SOD2相对表达量显著升高,造模后1、3d视网膜中Nrf2蛋白相对表达量显著升高,造模后3d视网膜中Atg4、LC3B-Ⅱ/LC3B-I蛋白相对表达量显著升高,差异均有统计学意义(均P＜0.05).PBS注射组各时间点未见明显阳性染色细胞,RD模型组造模后1、3和7d均可见感光细胞TUNEL阳性染色细胞,视网膜caspase-3水平较PBS注射组显著升高,依达拉奉治疗组造模后1、3、7d感光细胞凋亡指数及视网膜caspase-3水平均较RD模型组显著降低,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 采用依达拉奉每天2次腹腔内注射能明显提高RD大鼠视网膜的抗氧化能力,调控视网膜自噬,减轻RD早期感光细胞凋亡的发生.