鼠源性髓过氧化物酶特异性抗中性粒细胞胞质抗体的制备及鉴定

摘要

采用鼠源性髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)与弗氏佐剂混合注射的方式制备小鼠MPO特异性抗中性粒细胞胞质抗体(anti-neutrophil cytoplasmic antibody,ANCA),并予以定性及定量检测。使用B6.129X1-Mpo^(tm1Lus)/J小鼠(即MPO敲除小鼠),将mMPO与完全/不完全弗氏佐剂混合,通过腹腔注射方式诱导小鼠产生适应性免疫应答。采用定性ELISA以及间接免疫荧光法检测小鼠血清ANCA水平;采用肌酐检测试剂盒(肌氨酸氧化酶法)检测小鼠血清肌酐水平以评估其肾功能。ELISA检测结果显示,实验组小鼠血清MPO-ANCA的光密度D(450 nm)值较对照组显著升高(P0.05)。由此,注射MPO与弗氏佐剂混合液诱导MPO-/-小鼠产生了抗MPO-ANCA,ELISA和细胞免疫荧光实验均验证了抗体的生成,可为进一步构建实验性血管炎小鼠模型提供重要基础。