染料法荧光PCR鉴别卵形疟原虫curtisi和wallikeri亚种

摘要

目的建立染料法荧光PCR快速鉴别卵形疟原虫curtisi和wallikeri亚种。方法比对卵形疟原虫curtisi和wallikeri亚种的网织红细胞结合蛋白2(porbp2)基因,设计特异性引物,建立扩增卵形疟原虫curtisi和wallikeri亚种的染料法荧光PCR方法,进行熔解曲线分析,测定各亚种扩增产物的熔解温度,进行特异性、重复性和准确性评价。结果熔解曲线分析结果显示,建立的方法扩增卵形疟原虫curtisi和wallikeri亚种的熔解温度相差明显,curtisi亚种为74.2℃,wallikeri亚种为75.7℃。该方法虽可检测到其他3种疟原虫,但敏感度较低,卵形疟与其他3种疟原虫的熔解温度差别明显。重复性实验表明,该方法扩增卵形疟原虫curtisi和wallikeri亚种熔解温度变异系数均低于1%,重复性良好。对27份卵形疟原虫阳性样本的检测结果与巢式PCR分型结果完全一致。结论建立的染料法荧光PCR方法可快速对两种亚型卵形疟原虫进行鉴别。