心肌肌凝蛋白重链启动子的心血管组织特异性基因表达及其活性

摘要

目的 探讨心肌肌凝蛋白重链 （cMHC）基因启动子的心血管组织特异性及其表达活性 ,构建心血管组织靶向性表达的基因载体。方法 分别采用PCR法合成大鼠cMHC基因启动子片段 （- 16 0 0～ +32 ）和酶切法获得CMV启动子片段 ,以取代 pAdSV4nlacZ载体中的LTR启动子 ,获得pAdSV4nlacZ、pAdMHCnlacZ和 pAdCMVnlacZ。上述载体分别转染培养的大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）、心肌细胞 （CM ）、心肌成纤维细胞 （CF）和人胚肾细胞 （2 93细胞 ） ,观察lacZ基因在上述细胞中的表达活性。结果 β-半乳糖苷酶活性在 pAdSV4nlacZ和 pAdCMVnlacZ转染的各组细胞间无显著差异 ;pAdMHCnlacZ在转染的CM中lacZ基因的表达明显高于其他各组细胞 ,β -半乳糖苷酶活性在VSMC组低于CM组 ,高于CF和 2 93细胞 （P ＜0 0 1） ,在CF和 2 93细胞间无差异 （P ＞0 0 5 ）。结论 cMHC启动子的转录活性相对低于CMV启动子和LTR启动子 ,而在CM和VSMC中的表达活性高于CF和 2 93细胞 ,具有良好的心血管组织定向表达能力 ,适合用于心血管疾病的基因治疗。