hMSH2基因cDNA保守区域的T载体克隆及序列分析

摘要

目的 构建含限制性内切酶位点PstⅠ、KpnⅠ的hMSH2基因cDNA保守区域的pGEM T S载体 ,比较分析序列的变化 ,为以后的毒理学研究提供实验材料。方法 从人胚肺成纤维细胞HLF中抽提总RNA进行RT PCR扩增 ,直接与T载体连接后转化大肠杆菌DH5α ,用蓝 白斑试验筛选阳性克隆 ,抽提质粒进行酶切鉴定 ,再行序列分析。结果 经RT PCR获得 6 31bp含限制性内切酶位点的阳性产物 ,T载体克隆、酶切鉴定及序列分析后证实 ,克隆片段与genbank中该基因的序列同源性为 99 5 %。结论 本文成功地构建了含hMSH2基因cDNA保守区域的T载体克隆 ,该克隆可为DNA错配修复缺陷与致癌关系研究提供工具。