miR-6803和PPP6R1在食管鳞状细胞癌组织和细胞中的表达及其甲基化状态与患者临床病理特征的关系

摘要

目的:探讨微小RNA-6803（mi R-6803）及其宿主基因蛋白磷酸酶6调节亚单位1（protein phosphatase 6 regulation subunit 1,PPP6R1）在食管鳞状细胞癌（ESCC）中的表达和PPP6R1基因启动子区甲基化状态及其在ESCC发生及发展中的作用。方法:采用2013年至2014年间河北医科大学第四医院生物标本库的72例ESCC手术患者癌组织及对应的癌旁组织标本,用实时荧光定量PCR法检测mi R-6803和PPP6R1在ESCC组织及其癌旁组织和DNA甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷（5-Aza-d C）处理前后的ESCC细胞株TE1、TE13、Eca109、T.TN、Kyse170中的表达水平。用甲基化特异性PCR（MSP）法检测ESCC细胞系和组织及其癌旁组织中PPP6R1的甲基化状态,分析其与患者临床病理特征的关系。结果:ESCC组织中mi R-6803和PPP6R1的表达水平显著低于癌旁组织（0.318±0.156,0.408±0.177 vs 1.000±0.001,均P＜0.05）,mi R-6803表达水平与淋巴结转移、组织分化程度及TNM分期密切相关（均P＜0.05）;PPP6R1表达水平与TNM分期和组织学分化程度密切相关（均P＜0.05）。ESCC组织中mi R-6803和PPP6R1基因的表达具有显著相关性（P＜0.05）。ESCC组织中PPP6R1的启动子区甲基化率显著高于癌旁组织（56.94%vs 36.11%,P＜0.05）,并与TNM分期和组织学分化程度密切相关（均P＜0.05）,mi R-6803和PPP6R1基因的低表达与PPP6R1启动子区甲基化明显相关（P＜0.05）。经5-Aza-d C处理后,5种ESCC细胞中mi R-6803和PPP6R1的表达均升高,并且TE1、TE13、Kyse170细胞中PPP6R1基因甲基化程度降低,非甲基化程度增加,其余2种细胞中PPP6R1基因均表现为非甲基化状态。结论:mi R-6803及其宿主基因PPP6R1的低表达可能与ESCC的发生发展密切相关,其启动子区甲基化可能是mi R-6803和PPP6R1表达沉默的机制之一。