黄热病毒可视化RT-LAMP检测方法的建立

摘要

目的建立一种根据颜色变化判断结果的黄热病毒可视化RT-LAMP快速核酸检测方法。方法针对112株目前GeneBank上所有基因亚型黄热病毒株的5’端非编码区保守性核苷酸序列,设计黄热病毒特异性LAMP引物,建立黄热病毒可视化RT-LAMP检测方法。评价该方法的特异性、灵敏性,并用临床样本和模拟样本进行应用性验证。结果建立的RT-LAMP方法有较高的特异性,与登革病毒、裂谷热病毒、西尼罗病毒、乙脑病毒及基孔肯雅病毒无交叉反应;用体外转录的RNA模板评估,其灵敏性可达102拷贝/μl;用口岸发热病例血清样本验证,该方法可检出血清中的黄热病毒。结论建立的黄热病毒可视化RT-LAMP检测方法操作简便、快速、特异性好,可应用于黄热病毒的现场检测。