两种外泌体提取方法的比较以及外泌体对低氧肺动脉高压肺血管重构的作用

摘要

目的 比较超高速差速离心法和试剂盒法提取肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）源性外泌体的纯度，并评价超高速差速离心法提取外泌体的稳定性和适用性。探究低氧肺动脉高压（PH）大鼠血浆源性外泌体对PASMCs表型转化和肺动脉内皮细胞（PAECs）内皮间质转化的作用。方法 ① 收集PASMCs培养基上清液，分别用超高速差速离心法和试剂盒法提取外泌体，通过透射电子显微镜观察外泌体形态、纳米微粒示踪分析检测外泌体粒径分布、蛋白质免疫印迹法检测外泌体标志蛋白表达，评估外泌体纯度；② 收集PAECs培养基上清液和大鼠血浆，超高速差速离心法分别提取外泌体并评估外泌体纯度；③ 构建低氧PH大鼠模型，超高速差速离心法分别提取常氧和低氧大鼠血浆源性外泌体并作用于PASMCs和PAECs，免疫荧光检测各标志蛋白表达以评估外泌体对PASMCs表型转化和PAECs内皮间质转化的影响。结果 ① 超高速差速离心法提取的PASMCs、PAECs和血浆源性外泌体形态典型，纯度较高；而试剂盒法提取的PASMCs源性外泌体纯度较低。② 低氧PH大鼠血浆源性外泌体诱导PASMCs发生表型转化和PAECs发生内皮间质转化。结论 超高速差速离心法提取外泌体纯度优于试剂盒法，实验方法稳定且适用性强。低氧PH大鼠血浆源性外泌体可诱导PH肺血管重构。