人可溶性TRAIL蛋白在衣藻叶绿体中的表达

摘要

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)能选择性诱导多种肿瘤细胞凋亡而对正常细胞无毒性．以衣藻叶绿体基因组的clpP-trnL-petB-chlL-rpl23-rpl2为同源重组片段,壮观霉素抗性基因为选择标记,构建了编码TRAIL胞外区可溶性片段(sTRAIL)的cDNA衣藻叶绿体表达载体p64TRAIL,通过基因枪将其导入衣藻叶绿体中,经壮观霉素抗性筛选,获得了3个抗性衣藻转化子．转化子经过抗性继代筛选后,经PCR,Southern blot检测分析及暗培养,证实sTRAIL编码区DNA已整合到衣藻叶绿体基因组中,Western blot检测分析表明,sTRAIL编码区在衣藻叶绿体中获得了表达．Western blot影像摄录分析表明,表达的sTRAIL蛋白占衣藻细胞可溶性总蛋白的0．43％-0．67％．实验结果证明,用衣藻叶绿体作为生物反应器生产医药蛋白是可行的．