钝顶螺旋藻藻蓝蛋白β、α亚基基因的克隆及各亚基原核表达载体的构建与表达

摘要

目的克隆钝顶螺旋藻藻蓝蛋白(CPC)β、α亚基的基因序列,分别构建β和α亚基的原核表达载体,并在大肠杆菌内表达这2个亚基。方法首先利用PCR技术扩增钝顶螺旋藻藻蓝蛋白基因序列,将扩增产物克隆入pGEM-T easy载体内,测序分析插入片段的正确性。然后以克隆的cpc基因为模板分别扩增藻蓝蛋白的β和α亚基的编码基因cpcB和cpcA,经测序分析正确后将此二基因分别克隆入表达载体pGEX-4T-1,获得重组质粒pGEX-4T-cpcB和pGEX-4T-cpcA。将所构建的重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)pLysS内,用IPTG诱导重组蛋白表达。利用蛋白纯化树脂Glutathione Sepharose^(TM)4 Fast Flow纯化目的蛋白,并测定其浓度。结果在本次实验中成功克隆了钝顶螺旋藻的藻蓝蛋白β和α亚基的编码基因cpcB和cpcA,构建了它们的原核表达载体,并在大肠杆菌中分别表达了融合蛋白β-CPC-GST和α-CPC-GST,这2个重组蛋白的分子量分别为45 kDa和44 kDa,其中β-CPC-GST主要为包涵体,α-CPC-GST主要为分泌型表达。结论克隆并在大肠杆菌内成功表达了钝顶螺旋藻藻蓝蛋白的β和α亚基。