汉坦病毒G1糖蛋白毕赤酵母表达系统的构建

摘要

目的构建汉坦病毒HTN型和SEO型G1糖蛋白的毕赤酵母表达系统。方法应用RT-PCR法扩增汉坦病毒Z10株和L99株编码G1包膜糖蛋白的基因,将扩增产物分别与pMD18-T simple载体连接,经序列分析后双酶切,定向克隆入载体pPICZαA,继而用BstX I酶切线性化重组质粒并电转化入P.pastoris X33感受态细胞,用Zeocin筛选转化子进行鉴定。结果 PCR扩增产物Z10株为1 937bp、L99株为1 991bp,与T载体相连测序结果与GenBank相应序列比较,核苷酸序列同源性分别为99.5%和99.7%,其编码蛋白质二级结构均无改变。定向克隆毕赤酵母表达载体获得pPICZαA-Z10G1和pPICZαA-L99G1,分别电转化得到巴氏毕赤酵母重组菌株PpX33-Z10G1和PpX33-L99G1,提取其基因组DNA经PCR鉴定与预期相符。结论成功构建汉坦病毒HTN型和SEO型G1糖蛋白毕赤酵母表达系统,为进一步研究奠定基础。