荔枝核总黄酮对CCl4诱导的大鼠肝纤维化的影响及作用机制和潜在Q-marker的预测

摘要

考察荔枝核总黄酮(total flavonoids of Lichi Semen,TFL)对四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化的作用,并分析和预测TFL的作用机制和潜在质量标志物(quality marker,Q-marker)。雄性SD大鼠皮下注射40%CCl4植物油溶液,每周2次,连续8周,建立肝纤维化大鼠模型。将肝纤维化大鼠随机分成模型组、水飞蓟宾组(43.19 mg·kg^-1)、扶正化瘀胶囊组(462.75 mg·kg^-1)、TFL不同剂量组(100,25 mg·kg^-1),以正常大鼠作为空白组,每组10只。除空白组外,其余各组大鼠均皮下注射维持剂量的40%CCl4植物油溶液,每周1次。同时,各治疗组灌胃给予相应药物,空白组和模型组大鼠均灌胃给予等体积生理盐水,每天1次,连续4周。实验末,腹主动脉取血,收集肝脏。采用自动生化检测仪检测血清中总胆红素(total bilirubin,TBiL)、直接胆红素(direct bilirubin,DBiL)、间接胆红素(indirect bilirubin,IBiL)、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)水平,通过Masson染色观察大鼠肝组织病理学变化。然后,收集TFL的化学成分,通过SWISS数据库、反向分子对接服务器(DRAR-CPI)预测化学成分作用靶点。通过GeneCards数据库筛选肝纤维化的疾病靶点,STRING数据库分析蛋白-蛋白的相互作用并进行GO(gene ontology)及KEGG(Kyoto encyclopedia of genes and genomes)分析。接着,iTRAQ蛋白质组学技术测定TFL组、模型组、空白组大鼠肝脏组织蛋白表达,验证靶点。最后,通过Cytoscape软件建立和可视化化学成分、靶点、通路网络并分析TFL的潜在Q-marker。结果显示,与空白组比较,模型组大鼠血清中TBiL,DBiL,IBiL,ALT,AST水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,各给药组大鼠血清中TBiL,DBiL,IBiL,ALT,AST水平呈降低趋势,但没有显著性。Masson染色显示模型组大鼠肝损伤和纤维化程度均严重,各给药组大鼠的肝损伤程度和纤维化程度均呈现不同程度减轻。该文筛选得到74个化学成分,其可作用于EGFR,SRC等865个靶点,参与调控癌症途径、PI3K-Akt信号通路、HIF-1信号通路等多条与肝纤维化密切相关的信号通路。乔松素、槲皮素、表儿茶素、原花青素A2、柚皮素、川皮苷、根皮苷、芦丁与肝纤维化相关的靶点、通路关联度最高。蛋白质组学结果显示,在网络药理学预测的45个蛋白中,共有18个蛋白被鉴定。其中,与空白组相比,模型组有6个蛋白差异表达,其中上调蛋白5个、下调蛋白1个。TFL干预后,ALB,PLG,HSP90AA1,EGFR和MAP2K1显著回调。以上可见,TFL通过干预ALB,PLG,HSP90AA1,EGFR和MAP2K1表达发挥抗肝纤维化作用和潜在保肝作用,可能与调控PI3K-Akt通路等多条与肝纤维化相关的信号通路有关。乔松素、槲皮素、表儿茶素、原花青素A2、柚皮素、川皮苷、根皮苷、芦丁可作为TFL的潜在Q-marker用于制剂的质量控制。