人β-catenin启动子的克隆及活性分析

摘要

目的克隆β-catenin基因5′上游1.8 kb启动子,构建启动子-荧光素酶报告基因载体pGL3-1.8 kb,测定其启动子活性,为进一步研究β-catenin基因表达调控机制奠定基础。方法采用PCR方法从人基因组DNA中扩增β-catenin基因5′上游1.8 kb片段并构建到荧光素酶报道基因pGL3-basic载体中,与内参照质粒pRL-Tk共转染前列腺癌PC3细胞,通过双荧光素酶活性检验测定其启动子活性。结果PCR扩增的1.8 kb片段经测序正确无误;pGL3-1.8 kb转染PC3细胞48 h后,双荧光素酶活性测定启动子活性(M1/M2)为11.71,是pGL3-control活性的2.43倍,为pGL3-basic活性的206.31倍,为pGL3-promoter活性的21.38倍。结论克隆的β-catenin基因5′上游1.8 kb片段具有较强的启动子活性。