基于BIBAC文库的芦苇高分子量核DNA的制备方法

摘要

获得高质量的高分子量核DNA(HMW-DNA)是大片段DNA插入BIBAC载体的重要前提。为避免多酚等次生代谢物质对DNA的污染,前人研究多以黄化苗为材料。本研究对传统的Zhang等(1995)方法进行改良,以野生耐盐芦苇(Phragmites australis Trin.)的成熟叶片为材料,成功制备了高质量的芦苇高分子量核DNA(HMW-DNA)。改良Zhang法适合野生耐盐芦苇HMW-DNA的提取,提取过程更加温和,得到的细胞核相对纯净、完整度较高,后续蛋白酶K消化效果好,便于酶切。脉冲场凝胶电泳显示,本研究方法所制备的野生芦苇HMW-DNA的分子量大于1 Mb,经Bam HⅠ酶切后可获得较多的100~200 kb大片段DNA。因此,野生耐盐芦苇高分子量DNA质量完全满足芦苇BIBAC文库构建的要求。