兔窦房结细胞的分离方法及其起搏电流特征性探讨

摘要

探讨了家兔窦房结(Sino-Atrial Node,SAN)细胞的分离方法及其形态和起搏电流(Funny Current,If)的特征。通过打结定位法确定了带有"中心结区"的家兔SAN组织条,双酶法分离SAN细胞,利用全细胞穿孔膜片钳技术记录SAN细胞的If。结果显示,SAN组织为上宽下窄的枣核型,区域体积约为6.25mm×2.23mm×0.26mm,或6mm×2mm×0.1mm—6mm×2mm×3.3mm。SAN细胞成狭长梭形,无清晰横纹,细胞长(65.3±7.8)μm,宽为(7.2±3.1)μm。在正常Tyrode液中,可恢复规则自律性搏动,频率为(187.3±5.6)次/min,典型SAN细胞数量占整个分离细胞的2%—5%。根据电压钳制方案,If电流被引出,呈内向性斜坡状,随着钳制电压降低,起搏电流逐渐增大,并随钳制时间延长,倾斜度也增大。If带有明显尾电流,也随着超级化激活电位降低,逐渐增大。根据二者电流大小拟合的电流-电压曲线,呈典型横向Y形。本法获得SAN细胞形态典型,状态和活性良好,能够记录具有特征性的If,可供心血管领域有关针对SAN细胞If研究的技术借鉴。