重组腺病毒HBV preS2/S-AD5的构建及生物安全性初步研究

摘要

目的构建重组腺病毒HBVpreS2／S-AD5，并对其生物安全性进行初步评价。方法应用clontech公司的第一代腺病毒载体构建重组腺病毒质粒HBVpreS2／S-AD5，酶切线性化后分4次用脂质体方法转染HEK293细胞包装成复制缺陷型腺病毒HBYpreS2／S-AD5，分别命名为N1～4。扩增并滴定毒力后，接种Hep2、Hela和A549细胞，观察HBVpreS2／S-AD5在非容许细胞的增殖情况；同时，用N1～4分别鼻腔接种SPF级BALB／C小鼠，每日观察小鼠一般情况，第10d取小鼠重要组织并用福尔马林固定，做病理学检查。结果4株重组腺病毒HBVpreS2／S-AD5第1代N1、第4代N2、第6代N3、第8代N4株接种的细胞未见病变，接种的小鼠无一般状况改变，组织病理也未见任何改变；而第11代N1株重组腺病毒能在非容许细胞增殖并致细胞病变，接种的小鼠出现严重腹泻，并且小鼠肠、肺组织有明显的病理改变。结论本实验室构建的重组腺病毒HBVpreS2／S-AD5有突变为复制型腺病毒的现象，并可导致小鼠出现腹泻和轻型肺部炎症。