HBV X-HCV C融合基因重组腺病毒的构建及对肝细胞生物学行为的影响

摘要

生长状态的影响；平板克隆形成试验检测重组腺病毒感染后单个细胞增殖能力的变化；流式细胞术检测重组腺病毒对细胞周期分布状况的影响；TUNEL法检测重组腺病毒对TNF-a诱导的细胞凋亡的影响；半定量RT-PCR检测重组腺病毒感染后c-myc基因表达量的变化；裸鼠成瘤实验观察体内成瘤情况；所有计量资料以均数土标准差(x士S)表示，应用SPSSl2．0统计软件进行单因素方差分析(One-WayANOVA)比较组间差异，P<0．05为有统计学意义。 结果Ad-XC组细胞生长速度明显快于其余各组(P<0．01)；Ad-XC组克隆形成率高于其余各组(P<0．01)；流式细胞仪检测结果提示Ad-XC、Ad-X、Ad-C均能加速HepG2细胞周期由Gl→S的进程，以Ad-XC作用为著；TUNEL结果显示：经TNF-a诱导后，HepG2组、AdO组、Ad-C组、Ad-X组和Ad-XC组的凋亡指数分别为20．7％4±0．6％、21．8％4-0．9％、12．6％4-0．8％、11．7％4-0．9％和5．1％4-0．8％，提示重组腺病毒Ad-XC、Ad-X、Ad-C可不同程度地抑制细胞凋亡，以Ad-XC的抑制作用最强；半定量RT-PCR结果显示Ad-XC、Ad-X、Ad-C感染HepG2细胞后均可上调c-mycmRNA的表达，以Ad-XC的作用最强；裸鼠成瘤实验观察到实验组裸鼠有肿瘤生长。 结论重组腺病毒Ad-XC、Ad-X、Ad-C在体外能显著促进HepG2的增殖并抑制其凋亡，以Ad-XC为著，推测HBVX基因和HCVC基因具有协同致癌作用，这种作用可能是通过上调c-myc基因的表达实现的。裸鼠成瘤实验结果提示Ad-XC有体内成瘤作用。

目录

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符号说明

摘要

前言

第一部分HBV X-HCV C融合基因的构建及在真核细胞中的表达

第二部分重组腺病毒Ad-XC的构建

第三部分重组腺病毒Ad-XC对肝细胞生物学行为的影响

全文小结

本课题的创新点

文献综述HBV X蛋白和HCV核心蛋白在肝癌发生中的作用

致谢

攻读博士期间发表论文及参加学术会议