HBV大分子表面蛋白基因真核重组载体的构建和体外表达的初步研究

摘要

本研究的目的是探索HBV大分子表面蛋白基因(preS1/S2/S基因)真核重组载体在细胞中的表达及对细胞丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)p38等信号传导通路的影响.方法：设计合成2对寡核苷酸引物,以adr亚型HBV质粒pHBVDNA为模板,采用PCR法分别扩增HBV大分子表面蛋白基因(preS1/S2/S基因)片段;用HindⅢ和BamHⅠ双酶切后,连接到质粒pcDNA3.1(+)相应酶切位点,转化宿主菌DH5α,分别用上述内切酶双酶切及DNA测序鉴定重组质粒.真核重组载体脂质体法转染HepG2细胞,G418筛选抗性克隆,分别用EIA法测定目的基因的表达及细胞免疫组化法检测对细胞信号传导通路的影响.结果：成功构建了HBV大分子表面蛋白基因(preS1/S2/S基因)真核重组载体.preS1表位多肽、preS2表位多肽和HBsAg高效表达.细胞免疫组化示对细胞丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)p38等信号传导通路产生不同程度的影响.结论：所构建的真核重组载体转染细胞后可介导高水平抗原表达,并获得稳定表达的细胞株,preS1/S2/S基因对细胞信号传导通路有激活作用.