沉默Bmi-1基因表达对乳腺癌干细胞生物学特性的影响研究

摘要

目的探讨沉默乳腺癌MCF-7细胞B细胞特异的莫洛尼鼠白血病病毒插入位点1(B-cell-specific moloney murine leukemia virusinsertion site 1,Bmi-1)基因表达对乳腺癌干细胞生物学特性的影响。方法构建Bmi-1基因si RNA逆转录病毒表达载体,转染MCF-7细胞,筛选转染稳定细胞株,确定转染细胞组;设立干扰序列载体转染细胞组(阴性对照组)及空白对照组。无血清-有血清交替悬浮培养法富集乳腺癌干细胞,制备单细胞悬液。Western-blot检测乳腺癌干细胞Bmi-1蛋白表达。RT-PCR检测各组干细胞中人端粒酶逆转录酶(human telomerase revere transcriptase,h TERT)、血管内皮生长因子C(vascular endothelial growth factor VEGF-C)mRNA的表达。采用单因素方差分析对各组进行对比分析,P<0.05为差异有统计学意义。结果转染组h TERT、VEGF-C mRNA表达为(3.46±0.50)、(2.98±0.18)与空白对照[(6.88±0.21)、(5.74±0.29)]及阴性对照组[(7.35±0.62)、(6.02±0.51)]比较,两者显著下降(P<0.05);转染组Bmi-1蛋白表达为(3.31±0.19)较空白对照组的(7.55±0.27)及阴性对照组的(8.10±0.32)下降明显(P<0.05)。结论 Bmi-1siRNA能通过沉默乳腺癌MCF-7细胞Bmi-1基因表达,有效干涉乳腺癌干细胞生物学特性,为乳腺癌干细胞的靶向治疗提供了新思路。