‘法兰地’草莓LDOX基因的克隆及其过表达与沉默载体的构建

摘要

花色素苷是草莓果实的主要呈色物质,无色花色素双加氧酶(LDOX)是花色素苷合成途径中的关键酶。为探究LDOX基因在草莓花色素苷合成途径中的功能特性,构建‘法兰地’草莓LDOX基因的过表达与沉默载体。本试验用RT-PCR方法克隆出‘法兰地’草莓LDOX基因的CDS序列(1 152 bp)及干扰片段(468 bp),并成功用植物表达载体pRI101-An-EGFP及干扰载体pK7GWIWG2(Ⅱ)构建了过表达载体及沉默载体,同时对LDOX基因序列进行了生物信息学分析。经农杆菌介导瞬时转化后,可以观察到绿色荧光蛋白,表明过表达载体及沉默载体已成功转染草莓果实。qRCR验证表明,相比对照组果实,LDOX基因过表达的草莓果实基因表达量增加了3.7倍,沉默果实下降了70%,表明LDOX基因过表达与沉默成功。本研究为进一步探究LDOX基因的功能特性提供指导。