miR-98-5p靶向调控AKT2基因对人胃癌MGC803细胞增殖的影响

摘要

目的探讨人胃癌MGC803细胞中miR-98-5p和AKT2基因的表达,阐明miR-98-5p对AKT2基因的靶向调控作用以及对MGC803细胞增殖的影响。方法培养MGC803细胞并应用免疫组织化学技术检测AKT2基因的表达;采用生物信息学方法对miR-98-5p和AKT2基因的匹配关系进行预测并用双荧光素酶报告基因系统鉴定;转染miR-98-5p模拟物后,行real-time PCR检测miR-98-5p和AKT2基因的表达,Western blotting检测AKT2蛋白的表达,MTT法和平板克隆形成实验检测癌细胞的增殖情况。结果倒置相差显微镜下可见人胃癌M GC803细胞呈梭形或多角形,少数呈类圆形;免疫组织化学染色显示胞质内有AKT2蛋白的表达,呈棕褐色。靶基因预测软件miRanda和Target Scan显示miR-98-5p和AKT2基因匹配良好,双荧光素酶报告基因系统鉴定发现miR-98-5p能够结合AKT2 mRNA 3'UTR并有效抑制其表达。Real-time PCR和Western blotting检测结果均表明miR-98-5p的过表达能够下调AKT2基因表达。M TT法和平板克隆形成实验表明,miR-98-5p的过表达能够抑制M GC803细胞增殖。结论 miR-98-5p通过靶向作用于AKT2 mRNA 3’UTR负性调控人胃癌M GC803细胞中AKT2的表达,并抑制癌细胞的增殖。