重组汉逊酵母表达的HBsAgP24亚基间二硫键桥联程度等生化性状分析

摘要

目的分析重组汉逊酵母(Hansenula polymorpha,HP)表达的HBs Ag(HP-HBs Ag)P24亚基间二硫键桥联程度等生化性状。方法采用蔗糖垫层离心法检测HBs Ag的浮力密度,SDS-PAGE分析HBs Ag P24亚基间结合程度的变化,高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)分析HBs Ag VLP在硫氰酸盐处理前后百分含量的变化。以酿酒酵母(Saccharomyces cervesiae,SC)表达的HBs Ag(SC-HBs Ag)作为对照。结果 HP-HBs Ag的浮力密度为(1.085±0.014)g/ml,与SC-HBs Ag的浮力密度[(1.090±0.009)g/ml]接近。SDS-PAGE分析表明,未经硫氰酸盐处理时,HP-HBs Ag不能进入分离胶,而SC-HBs Ag能进入分离胶;经硫氰酸盐处理后,HP-HBs Ag和SCHBs Ag均不能进入分离胶。HPLC分析表明,流动相中含SDS时,HP-HBs Ag VLP的百分含量在经硫氰酸盐处理前后变化不明显,SC-HBs Ag VLP的百分含量在经硫氰酸盐处理后较处理前升高;在经硫氰酸盐处理前后,HP-HBs Ag VLP的百分含量均高于SC-HBs Ag。结论 HP-HBs Ag的浮力密度与SC-HBs Ag相近,HP-HBs Ag P24亚基间二硫键桥联程度较高,结合紧密,不需要经硫氰酸盐处理。