基于免疫磁分离技术的尿液HIV抗体高敏感性检测方法建立

摘要

目的研究建立基于HIV免疫磁分离前处理技术的尿液HIV抗体高敏感性检测方法。方法采用羧基磁珠和HIV特异性抗原通过碳二亚胺缩合反应,优化制备HIV免疫磁珠;采用BCA法对磁珠偶联前后的HIV抗原浓度进行测定,采用ELISA法对HIV免疫磁珠捕获前后的样本中HIV抗体吸光度(OD)值进行检测,采用HRP标记抗原对免疫磁珠捕获后的HIV抗体进行OD值检测,以抗原偶联率与HIV免疫磁珠的抗体捕获效率为指标,建立HIV免疫磁珠在尿液样本中的前处理体系与检测方法;使用100份阴性尿液样本进行Cut-off值设定;使用3套血液确证HIV抗体阳性尿液2^(1)~2^(10)系列稀释样本进行方法敏感性验证;使用100份血液确证HIV抗体阳性尿液与100份健康人群尿液进行方法初步应用。结果300 nm羧基磁珠在100∶4的投料比下制备的HIV免疫磁珠的抗原偶联率为79.0%;10μg/mL HIV免疫磁珠在1 mL和5 mL尿液样本中室温捕获15~30 min后的抗体捕获效率为80.42%~93.99%;基于HIV免疫磁珠前处理技术的高敏感性检测方法Cut-off值为0.56;对3套2^(1)~2^(10)系列稀释HIV抗体尿液样本的检测敏感性较常规ELISA提高16~512倍;该方法对100份血液确证HIV抗体阳性的尿液检出数(81)高于常规ELISA检出数(52);全部验证与应用实验中均未发现阴性样本的假阳性现象。结论本研究建立的HIV免疫磁珠制备体系与HIV免疫磁珠尿液样本前处理技术,均具有良好的应用稳定性与检测有效性,基于HIV免疫磁分离技术的尿液HIV抗体检测方法敏感性高于目前ELISA检测方法。