一个蛇苔氧甲基转移酶基因的克隆与功能鉴定

摘要

目的克隆蛇苔氧甲基转移酶(CcOMT1)基因并对其进行功能鉴定。方法通过RT-PCR技术获得CcOMT1基因的c DNA全长。构建原核表达质粒p ET32a-CcOMT1,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达后,利用Ni-NTA吸附柱对表达的重组蛋白进行纯化,并通过体外酶活分析其活性。采用DNAMAN 7.0和MEGA 5.1软件分别进行氨基酸多序列比对和进化关系分析。结果克隆得到的CcOMT1开放读码框为837 bp,编码278个氨基酸,预测分子量为30.95 k Da,等电点为5.59。与来自钝鳞紫背苔、紫花苜蓿和冰叶日中花的氧甲基转移酶的同源性分别为73.18%、53.60%和44.60%。对纯化的重组蛋白进行酶活检测,结果表明融合蛋白可以催化具有邻二酚羟基的黄酮和苯丙类化合物,产生相应的氧甲基化产物,其最适底物为槲皮素。结论克隆并鉴定了一个CcOMT1基因,为通过酶法实现化合物的氧甲基化修饰提供了一个候选基因。