丝状支原体山羊亚种脂蛋白LPPA基因的定点突变及原核表达

摘要

采用PCR的方法扩增出丝状支原体山羊亚种(Mycoplasma mycoides subsp.capriclonum,Mmc)模式株PG3的脂蛋白LPPA基因并对其反应原性进行了研究。该基因中含有1个密码子TGA,在支原体中编码色氨酸,却在原核表达系统中作为终止密码子,因此结合定点突变的方法将LPPA基因序列中TGA同义突变为TGG,并构建重组表达质粒pET-LPPA,然后将其转入宿主菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达产物经SDSPAGE检测,在64 ku处出现目的条带,将重组蛋白纯化后经Western blot分析,重组蛋白能与Mmc模式株PG3兔高免血清发生特异性反应,具有良好的反应原性。