呼出气冷凝液中尿素的高效液相色谱-串联质谱测定法

摘要

目的建立呼出气冷凝液(exhaled breath condensate,EBC)中尿素的液相色谱-串联质谱(LC-MS-MS)测定方法。方法将100μl的EBC样品加入50.0μl的40 ng/ml Urea-^(15)N_2内标,于-70℃冷冻20 min后,置于真空冷冻浓缩装置,-56℃真空冷冻浓缩至干,加入20.0μl甲醇,振荡混匀。以HILIC Plus色谱柱(4.6 mm×100 mm,3.5μm)进行分离,以0.2%甲酸水溶液-甲醇(体积比为5∶95)为流动相,在正离子模式下,质谱多反应监测(MRM)模式检测,内标法定量。结果尿素在5.3~400 ng/ml的范围内,所得尿素的回归方程为y=0.008 82x+0.318,r=0.999 5,线性关系良好。该方法的检出限为1.6 ng/ml,定量下限为5.3 ng/ml,回收率在95.1%~102.3%之间,RSD<6.0%。结论该方法具有灵敏度高、稳定性好、所需样品量小的特点,适用于呼出气冷凝液中尿素的测定。