沙门菌TanqMan-MGB探针实时荧光PCR检测技术研究

摘要

目的:研究沙门菌TaqMan-MGB探针实时PCR检测,建立一种快速、准确检测沙门菌的方法。方法:以Taq-Man-MGB探针技术为基础,根据沙门菌invH基因设计引物,利用实时荧光PCR技术开展沙门菌检测。用各类菌株、食品标本及克隆到pMD18-T载体上的invH基因片段检验所建方法的特异性和敏感性。结果:应用阳参制作的标准曲线,其循环阈值与模板浓度的对数值具有很好的对应关系(r=0.997),最低检测限为7.1×10-2拷贝/μl。检测75株各类沙门菌均为阳性。检测86株志贺菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和副溶血性弧菌等非沙门菌菌株均为阴性。对2株沙门菌、1株大肠杆菌隔天连续进行6次检测,Ct值的变异系数0.05)。纯菌1.5 h,食品样品9.5 h即可出结果。结论:本研究所建立的沙门菌实时荧光PCR方法具有特异性强,敏感性高,简便、快速的优点,有很好的应用前景。