鳞尾木ISSR-PCR反应体系的建立与正交优化

摘要

为建立与优化广西药食两用植物鳞尾木的ISSR-PCR反应体系和扩增程序,本研究采用正交和单因素试验设计方法,对影响鳞尾木ISSR-PCR反应体系的d NTPs、Taq DNA聚合酶、引物、模板DNA及Mg2+浓度5个因素进行了优化试验,建立了稳定的、可重复的鳞尾木ISSR-PCR扩增反应体系。结果显示:在20μL的反应体系中,dNTPs浓度为0.4 mmol/L、Taq DNA聚合酶用量为1.5 U、引物浓度为0.8μmol/L、Mg2+浓度为2.0 mmol/L、模板DNA浓度为45 ng。扩增程序为:在94℃条件下预变性5 min;94℃条件下变性30 s,52.9℃条件下退火30 s,72℃条件下延伸30 s,以上3个步骤循环40次,最后72℃延伸10 min。这一优化体系的建立可为深入开展鳞尾木种质资源遗传多样性的研究提供帮助。