熟地黄多糖的提取及其体外抗氧化活性研究

摘要

目的研究熟地黄多糖的最佳提取方法,评估熟地黄多糖的体外抗氧化活性,为进一步的体内活性研究提供依据。方法采用水提醇沉法、微波提取法和超声波提取法提取熟地黄多糖,筛选出得率最高的方法。通过Sevag法除去粗多糖中的蛋白成分,透析法除去小分子,活性炭除色素后,得到精制多糖,苯酚-硫酸比色法测定多糖含量。通过4种不同的抗氧化体系以及细胞水平的实验,检测了多糖的体外抗氧化活性,包括羟自由基、超氧阴离子自由基、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基的清除效果、总抗氧化能力(Total antioxidant capacity,T-AOC)、对细胞内超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH-px)活力以及丙二醛(MDA)水平的影响。结果精制的熟地黄多糖(Rehmanniae Radix Preparata polysaccharides,RGP)清除羟自由基EC_(50)值为1.51 mg/mL,清除超氧阴离子自由基EC_(50)值为3.04 mg/mL,清除DPPH自由基的EC_(50)值为0.26 mg/mL,其总抗氧化活性为18.85±0.80 U/mg。与阳性对照2,6-二叔丁基对甲酚(2,6-Di-tert-butyl-4-methylphenol,BHT)相比,熟地黄多糖具有较好的DPPH自由基清除作用、一定的羟自由基和超氧阴离子自由基的清除能力,并且与多糖浓度呈现出剂量效应。而且熟地黄多糖能够有效提高H2O2所导致的SOD和GSH-px活力降低的情况,以及降低H_(2)O_(2)诱导的MDA水平升高的情况。熟地黄多糖还具有很好的总抗氧化能力。结论传统中药熟地黄的多糖成分具有良好的体外抗氧化活性,具有开发为天然抗氧化剂和食品保健品的潜在价值。