地塞米松拮抗脂多糖对TRPC6表达及足细胞损伤的影响

摘要

目的观察脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导足细胞(podocyte,PC)瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(transient receptor potential cation channel 6,TRPC6)表达及胞内Ca2+浓度的变化,探讨地塞米松(dexamethasone,DEX)对TRPC6及Ca2+变化的影响。方法体外分化培养的永生化小鼠PC随机分为:1对照组;2LPS组;3DEX组;4LPS+DEX组。Fura-2/AM负载检测细胞内Ca2+浓度,Annexin V-FITC/PI标记流式细胞测定PC的凋亡百分率,免疫荧光染色及半定量分析骨架蛋白F-肌动蛋白分布及数量,Western blotting检测足细胞TRPC6、nephrin及desmin蛋白的表达。结果1对照组、DEX组、LPS组、LPS+DEX组PC Ca2+荧光强度变化分别为15.6±6.1、17.8±6.5、116.2±15.4、57.2±13.6;凋亡百分率分别为(0.44±0.24)%、(0.45±0.18)%、(2.28±0.36)%、(1.78±0.33)%;F-肌动蛋白平均荧光强度分别为925±136、924±148、217±44.4、634±71.9;TRPC6蛋白的表达分别为0.33±0.09、0.36±0.08、0.81±0.13、0.61±0.12;nephrin表达为1.14±0.15、1.10±0.15、0.39±0.11、0.68±0.10;desmin表达为0.32±0.05、0.38±0.04、1.01±0.15、0.84±0.14。2与对照组及DEX组相比,LPS组足细胞Ca2+浓度增加,凋亡百分率增加,F-肌动蛋白减少,TRPC6、desmin表达增加,nephrin表达降低。3与LPS组相比,LPS+DEX组足细胞Ca2+浓度及凋亡百分率降低,F-肌动蛋白增加,TRPC6、desmin表达下调,nephrin表达上调。结论 DEX拮抗LPS引起足细胞TRPC6高表达及细胞内Ca2+水平增加,对足细胞有保护作用。