黑豆种子中一种耐热型胰蛋白酶抑制剂的分离及性质表征

摘要

应用硫酸铵分级沉降、弱阳交换色谱CM-Sephadex C-50、凝胶过滤色谱Sephacryl S-200HR、强阳离子高效液相色谱POROS HS-20,从黑豆种子中分离纯化一种耐热型蛋白酶抑制剂,命名为TSTI.该蛋白的N末端序列为DEYSKPCCDLCMCTRRCPPQ,与豆科植物Bowman-Birk型胰蛋白酶抑制剂具有高度同源性,推测其属于Bowman-Birk型胰蛋白酶抑制剂.SDS-PAGE和IEF测出TSTI分子量和等电点分别为23.9 kD和6.2.TSTI对胰蛋白酶有很强的抑制作用,当二者摩尔比达到1时,胰蛋白酶活力被完全抑制.此外,该蛋白酶抑制剂具有很强的热稳定性和pH稳定性,在高达100℃温度及pH2-12范围内处理,其活性均不会受到太大影响.TSTI对植物致病菌苹果轮纹病菌、瓜果腐霉病菌、白菜黑斑病菌、甜瓜枯萎病菌和葡萄灰霉病菌具有抑制作用.