腹水细胞HBV DNA荧光PCR检测方法的建立及意义研究

摘要

目的：采用细胞病毒裂解液快速提取腹水细胞内的HBV DNA,建立实时荧光定量PCR检测HBV DNA的技术,并初步研究其临床意义。方法：采用乙肝肝硬化患者腹水10 m l,1500 g/m in离心5 m in,全部吸出上清,对沉渣细胞进行HBVDNA荧光定量检测。结果：采用荧光PCR技术检测腹水细胞HBV DNA,检测出的数值可达到到102 IU/m l,并且按稀释倍数呈理论梯度,相关系数为0.91,该方法具有良好的敏感性。进行重复性研究发现,5次重复的CV值分别为14.4%、9.8%和11.2%,符合卫生部临床检验中心的偏差要求。腹水细胞HBV DNA含量明显高于单纯腹水中的HBVDNA,二者之差为0.5~1.5个数量级,说明腹水细胞不但含有大量的HBV,而且个体差异明显。对一例乙肝肝癌并发腹水患者每间隔5 d进行三次沉渣细胞HBV DNA动态检测,发现沉渣细胞的HBV DNA与血清HBV DAN同时随患者病情加重而呈逐渐下降趋势。结论：基于用荧光PcR的检测方法来测定腹水细胞HBV DNA,操作简单,具有较好的敏感性和重复性,可作为研究腹水细胞内HBV DNA临床意义的检测手段。