带有REV-LTR片段的MDV野毒株GX0101 BAC克隆的构建及拯救病毒的致病性分析

摘要

将整合有禽网状内皮组织增生症病毒(reticuloendotheliosis,REV)长末端重复序列(LTR)的马立克氏病病毒(命名为GX0101)全基因组作为细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome,BAC)克隆进大肠杆菌.BAC载体通过同源重组插入MDV基因组的US2区,含BAC载体的MDV DNA电转化大肠杆菌菌株DH10B,鉴定含MDV全基因组的BAC克隆(MDV BAC),提取BAC DNA,转染原代鸡胚成纤维细胞(CEF),成功拯救出了重组病毒,命名为bac-GX0101.将此病毒腹腔接种1日龄鸡,在攻毒后62d开始检测到内脏肿瘤,动物实验结果表明,bac-GX0101毒株与亲本GX0101毒株对机体的致病性等方面的影响没有差异,bac-GX0101毒株仍然保留着很好的免疫抑制功能及致肿瘤能力.该感染性克隆bac-GX0101为研究该重组野毒株中REV-LTR插入片段及其他基因的生物学功能提供了有用的技术平台.