汉滩病毒A9株强毒和弱毒克隆M基因片段G1糖蛋白编码区核苷酸序列的分析比较

摘要

采用逆转录－ＰＣＲ方法，用３对引物分３个片段扩增强毒克隆（Ａ９ｖ）及弱毒克隆（Ａ３％）的Ｍ基因片段ｃＤＮＡ，并克隆入ｐＧＥＭ－Ｔ载体中。采用Ｓａｎｇｅｒ双脱氧法测定了Ａ３９ｓ、Ａ９ｖ病毒Ｇ１糖蛋白编码区的全序列，发现二者均由１９７８个核苷酸组成，比７６／１１８株少６个核苷酸，并发现Ａ３９ｓ在Ｇ１编码区有３３个碱基及８个氨基酸与Ａ９ｖ不同。进一步与７６／１１８、ＨＶ１１４的相关序列比较，发现Ｇ１编码区的第６０６、６１４位氨基酸的变异同Ａ３９ｓ病毒的减毒有一定相关。从Ａ３９ｓ、Ａ９ｖ、７６／１１８及ＨＶ１１４４株病毒Ｇ１糖蛋白编码区推导的氨基酸序列亲疏水性资料显示，在位于Ｇ１糖蛋白Ｃ末端的最大亲水区域的６００～６２０位氨基酸区域，弱毒株Ａ３９ｓ同强毒株Ａ９ｖ、７６／１１８、ＨＶ１１４的亲水性有明显不同，而这一差异又主要由第６１４位氨基酸的变异所引起。因此推测，Ｇ１糖蛋白Ｃ端亲水区域同汉滩病毒毒力相关，而第６１４位的精氨酸被谷氨酰胺取代，同Ａ３９ｓ病毒毒力的减弱可能有关。