基于γH2AX和微核的流式细胞法检测NNK与AαC遗传毒性

摘要

目的探讨烟草特有亚硝胺NNK和杂环胺AαC的遗传毒性,对γH2AX焦点与微核分析结果进行比较。方法以0、25、50、100、200和400μg/ml的NNK,0、2.5、5、10、20和40μg/ml的AαC分别染毒中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)24 h后,采用MTT试验检测细胞存活率,采用流式细胞仪检测NNK和AαC各剂量诱导的γH2AX焦点率和微核率,并比较γH2AX焦点率与微核率的差异。结果NNK各剂量的γH2AX焦点率分别为:(1.98±0.15)%、(2.28±0.04)%、(2.86±0.13)%、(3.14±0.09)%、(3.88±0.21)%和(4.34±0.20)%。与阴性对照相比,NNK剂量为25μg/ml时,γH2AX焦点率的差异有统计学意义(P<0.05)。AαC各剂量的γH2AX焦点率分别为:(3.81±0.15)%、(3.24±0.25)%、(3.47±0.21)%、(3.90±0.14)%、(6.12±0.14)%和(11.98±0.24)%。与阴性对照相比,AαC剂量为10μg/ml时γH2AX焦点率的差异有统计学意义(P<0.05)。NNK各剂量的微核率分别为:(1.50±0.22)%、(1.76±0.44)%、(3.26±0.27)%、(4.01±0.88)%、(7.50±0.70)%和(14.67±1.08)%;与阴性对照相比,NNK剂量为50μg/ml时微核率的差异有统计学意义(P<0.05)。AαC各剂量微核率分别为:(1.42±0.50)%、(1.47±0.43)%、(1.42±0.35)%、(1.88±0.15)%、(5.88±1.15)%和(10.67±1.82)%。与阴性对照相比,AαC剂量为20μg/ml时微核率的差异有统计学意义(P<0.05)。结论一定剂量的NNK和AαC可以诱发体外遗传毒性;与流式微核方法相比,流式γH2AX方法灵敏度更高。