肝损伤相关循环miRNAs检测方法的建立与初步应用

摘要

目的建立可靠的循环mi RNA定量技术,并探讨在检测肝损伤相关mi RNA中的应用价值。方法常规收集正常人血清(浆)标本,mirVanaPARIS试剂盒法抽提血清(浆)小RNA,以mi RNA特异引物引导逆转录,通过Taq Man实时荧光定量PCR对内参U6及mi RNAs进行检测。结果常规收集的临床正常血清标本中U6、mi R-122、mi R-192均能实现特异扩增及定量,相应的平均Ct值约分别为33、27和30,对3份不同留置时间人血清标本定量PCR结果显示,mi R-122、mi R-192和U6的丰度相对稳定;临床肝损伤患者循环mi R-122批内和批间差异分别为1.5%、2.5%,用同法检测胆汁淤积肝损伤模型小鼠循环mi R-122结果显示,循环mi R-122在造模后1 d和3 d增高明显。结论实时定量PCR技术为研究mi RNA提供了较好的技术平台。